基孔肯雅熱試劑的試驗(yàn)步驟點(diǎn)擊次數(shù):919 更新時(shí)間:2017-10-18
基孔肯雅熱的特征是突然發(fā)熱,經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)痛。其他常見(jiàn)癥狀還包括肌肉疼痛、頭痛、惡心、疲勞和皮疹。關(guān)節(jié)疼痛通常使患者極為虛弱,但往往持續(xù)數(shù)天或延長(zhǎng)至數(shù)周。因此,該病毒可引起急性、亞急性或慢性疾病。在開(kāi)始試驗(yàn)前,請(qǐng)仔細(xì)閱讀試驗(yàn)說(shuō)明。結(jié)果的可信度是依賴于嚴(yán)格地按照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明來(lái)進(jìn)行的,鋪板時(shí)zui少留1個(gè)孔為空白對(duì)照(A1)1個(gè)陰性質(zhì)控孔(B1)2個(gè)臨界質(zhì)控孔(C1+D1)1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控孔(E1)。開(kāi)始試驗(yàn)前,請(qǐng)將所有試劑都平衡到室溫
1.吸取50μL的質(zhì)控品和稀釋過(guò)的樣本到相應(yīng)的孔中,留A1孔做空白對(duì)照孔;
2.封板;
3.在37±1℃下孵育1小時(shí)±5分鐘;
4.當(dāng)孵育完成時(shí),揭去封板片,棄去反應(yīng)液,每孔300μL洗滌液,洗板3次,避免溢出。每孔浸泡的時(shí)間都必須>5秒,zui后拍板將殘留的液滴都拍去。
5.吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白對(duì)照孔的每個(gè)孔中,蓋板;
6.在室溫孵育30分鐘;
7.重復(fù)步驟4;
8.將基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素結(jié)合物混勻10分鐘;
9.吸取50μL基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素的復(fù)合物到除了空白對(duì)照孔的每個(gè)孔中,蓋板。
10.室溫孵育30分鐘 ;
11.重復(fù)步驟4;
12.吸取100μLTMB底物液到每個(gè)孔中;
13.避光孵育15分鐘();
14.加入100μL終止液到每個(gè)孔中,與加TMB底物液時(shí)的間隔和順序都必須一樣;
15.用酶標(biāo)儀在加入終止液后30分鐘內(nèi)與450/620nm處檢測(cè)。