多通道熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實驗技術(shù)成熟的今天,也許對你來說,難得不是實驗技術(shù)上的問題,而是選擇哪一種熒光定量PCR儀,面對各種不同性能的產(chǎn)品,您又該如何選擇呢?
選擇PCR儀前,首先建議大家走出認識熒光定量PCR的兩個誤區(qū):
誤區(qū)一:儀器通道越多越好
隨著PCR技術(shù)的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。從單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區(qū)。
考慮多通道熒光定量PCR儀的通道數(shù)的時候也應(yīng)該從實驗室實際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因為它使實驗復(fù)雜化了。
誤區(qū)二:PCR儀無需梯度功能
對于使用染料法的定量PCR反應(yīng),雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度(Tm值),但運用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會很大。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問題——在反應(yīng)過程中每個孔的溫度控制條件可以在指定范圍內(nèi)按照梯度變化,根據(jù)結(jié)果,一步就可以摸索出適合的反應(yīng)條件。
使用有梯度功能的熒光定量PCR可以一次完成以往多次實驗才能完成的優(yōu)化過程,簡化了摸索PCR反應(yīng)條件的繁瑣實驗,既節(jié)省實驗時間提高效率,又節(jié)省實驗成本。